Фактор нервного роста

Первые попытки приготовления антисыворотки осуществил Кохен (1960). Как и при последующих вариантах, примененный метод представлен иммуни­зацией кролика к. В этих целях применялись раз­личные препараты и наиболее часто протеиновая вытяжка подчелюстной слюнной железы взрослого самца мыши с очисткой по методу Кохена (1960) Анджелетти, Калиссано и сотр. (1967), Боккини и Анджелетти (1969), Шен — кейна и Буекера (1962 а, б), Варона, Номура и Шутера (1967 а, б). Прини­мая во внимание, что затруднения в связи с приготовлением и высокой очисткой не позволяет получить большие количества фактора, иммунизацию произ­водят как можно меньшими количествами: например, применяется впрыски­вание — с промежутками в одну неделю — в полноценный вспомогательный препарат Фрейнда, а спустя 3 недели производятся внутривенные вспрыски­вания по 200 микрог (Занини, Анджелетти, Монталчини, 1968). Оригинальный метод Кохена (1960) состоит в единственном впрыскивании 4 микрог активного препарата NGF ин витро в концентрациях по 0,05 микрог, разведенном в 1 мл полноценного вспомогательного препарата Фрейнда. Концентрат фактора нервного роста, извлеченный и очищенный нами из подчелюстной железы мыши (Брэништяну, 1973) был впервые использован для приготовления гомологичной антисыворотки путем иммунизации взрос­лого кролика самца весом 2500 г. Имея ввиду сниженную антигенность пре­парата, а также необходимость максимального соблюдения экономии, мы сочли нужным использовать следующую схему иммунизации: В первый день назначался препарат NGF, разведенный в равных частях вспомогательного препарата Фрейдна «Дифко» — одновременно внутрикожно в подушечки 4 конечностей кролика, а также и внутримышечно в общей дозе, равной 2 мг антигена. Спустя 8 дней было произведено повторное впрыски­вание в тех же условиях, с добавлением дозы 0,2 мг без препарата Фрейнда, внутривенно в краевую вену уха. Спустя 10 дней после последнего впрыски­вания в подобных условиях было произведено еще одно впрыскивание. Спустя 4 недели после первого дня иммунизации было взято 20 мл крови и после отделения сыворотки, при помощи метода иммунопреципитации в геле, было тестировано появление антител анти NGF.

Добавить комментарий