Количественное определение биологической активности препаратов фак­тора нервного роста

Оно впервые осуществили в 1954 г. Леви-Монталчини, Шейер и Гамбурже. Они применили культуру ин витро в полуплотной питательной среде, состоящей из сензориальных и симпатических ганглиев 8-дневного птичьего зародыша для тестирования эффекта нервного роста фрагментов саркомы. В настоящее время это тестирование является наиболее надежным средством выявления активности NGF при помощи так называемого эффекта «волокнистого ободка». Этот ободок представляет собой лучевое образование, состоящее из нервных волокон, вырастающих из ганглия под действием фак­тора. Леви-Монталчини (1965, 1966), использует пропорциональность между размером ободка и дозой NGF для определения биологической единицы активности фактора. В настоящее время считается биологической единицей количество очи­щенного NGF, которое в состоянии в течение 12—13 часов обусловить поя­вление волокнистого ободка с одинаковой плотностью вокруг ганглия, в кото­ром каждый его луч представляет собой нервное волокно, резко заканчиваю­щееся в питательной среде, образуя с остальными волокнами эллипсоидаль­ное или круглой формы кольцо, совершенное с геометрической точки зрения; биологическая единица в этого рода условиях равна 1 мг NGF, очищенного по методу Кохена (1960). Высокая очистка, которую мы осуществили при помощи метода Бок­кини и Анджелетти (1969) позволила нам получить активность равную 500 U. В./микрог протеина. Несмотря на скорость, этот метод биологического тестирования сопровождается все же некоторыми затруднениями в том смысле, что при суб — и супрамаксимальных дозах, отношение ободок-концентрация не ясно выражено, а количественное определение требует использования широкой гаммы концентрации. При супрамаксимальных дозах повышение количества в 2—5 раз вызывает появление более плотного волокнистого ободка, но он является более коротким, в то время как дозы, в 10—100 раз более высокие, не ведут к появлению ободка. Это явление вначале было интерпретировано как тормозящее действие больших доз (Леви-Монталчини, Анджелетти, 1961 а). Позже было отмечено, что при этих дозах волокна не растут ради­ально, а образуют капсулу, толщина которой пропорциональна дозе; в случаях субмаксимальных доз, ободок хотя иногда и сохраняет свои размеры, утрачи­вает свою плотность и состоит из нескольких нерегулярно расположенных волокон.

Добавить комментарий