Химические свойства, приготовление и титрование фактора нервного роста и гомологической антисыворотки

Как об этом было выше упомянуто, первые опухолевого происхождения вытяжки классифицировали NGF как термо­лабильный и недиализируемый нуклеопротеин микрозомиального проис­хождения. Кохен (1958, 1959), Кохен и Монталчини (1956) пытаясь очистить вытяжку путем инактивирования ядерных кислот, пользовались в качестве источника фосфодиэестеразы змеиным ядом. Они с удивлением обнаружили наличие значительных количеств NGF, в 100 раз больших, чем при саркомах. Исследуя полученный из этого нового источника NGF, Кохен (1959) обна­ружил в 2—4 раза большие количества у Elipsidae и Viperidae по сравнению с Crotolidae. После предварительной очистки мокасиновый змеиный яд содержит 5,2 мг активного протеина/г яда с РМ 20.000. Обработка трипсином, пепсином, химотрипсином вызывает утрату активности. Оригинальный метод, который предложил Кохен с предварительным воздействием мочевины 6 М, Анджелетти, Калиссано и сотр. (1967) заменили более «мягкими» фракциониро­ваниями, которые обнаружили сочетание NGF-активности с различными молекулярными агрегатами. Так, например, после фракционирования на«Сефа — декс Г-100» биологическая активность появляется во фракции с 40.000 РМ, из которой после хроматографии с использованием ДЕАЕ-целлюлозы реку­перация осуществляется во фракции, обладающей 20.000 РМ. Происхождение этой фракции через колонку СМ целлюлозы при pH — 5 позволяет получить 2 электроположительных активных компонента с молекулярным весом 22.000 и, соответственно, 12.000. Обе эти фракции обладают тождественной струк­турой аминокислот, но с активностью в 2 раза большей у первой аминокис­лоты, а иммунохимические данные указали на наличие одинаковой первичной структуры, а различия очевидно заключаются в степени полимеризации. Основанные на аминокислой структуре вычисления указывают, повидимому, на наличие мономера с РМ 5000, который до настоящего времени еще не был обнаружен.

Добавить комментарий